亲和色谱法步骤

蛋白质亲和层析

出版于均质化,暂停

通常，色谱法发生填充到柱中的固体载体（通常称为树脂或基质），形成固定相。流动相，含有分子混合物的溶液，从一端移动到另一端。分子中的化学和物理差异导致通过柱基质的不同通道速率，导致分离。

亲和层析是一种强大的色谱，用于分离和纯化感兴趣的分子，特别是生物大分子如蛋白质。这种技术的高选择性和解决方案使其成为实验室和过程规模应用的流行。

亲和层析对纯化感兴趣的分子具有高选择性和分辨率。

亲和层析的工作原理通常用锁和钥匙的类比来解释，并在下面的图表中进行说明。一个特定的配体，也就是关键，被偶联到树脂上。流动相是许多蛋白质和其他细胞碎片的复杂混合物，与制备的树脂接触。在流动相内是锁，目标蛋白的化学性质创造一个独特的强亲和力的关键。在结合过程中，当蛋白质混合物与配体接触时，“关键”配体抓住并抓住相应的“锁定”蛋白质，使它们粘在树脂上。在清洗之后，其他的蛋白质和污染物，没有被固定在树脂上，被冲走，只留下感兴趣的蛋白质。洗脱是最后一步，现在从树脂中释放纯化的蛋白质，这样它就可以被收集起来进行进一步的纯化或其他处理。

亲和色谱法过程

开销搅拌器在亲和层析过程的几个步骤中特别有益：

  1. 将配体耦合到支持矩阵
  2. 在结合缓冲液中平衡基质珠的浆料
  3. 悬挂基质浆料以准备包装柱
  4. 在结合相期间将具有大体积（> 200mL）细胞裂解物的混合树脂
  5. 再生使用的树脂
  6. 悬浮树脂作为去除罚款的第一步

许多亲和树脂和柱状产品插入专门警告使用磁力搅拌器

许多亲和树脂和柱产品插入特别警告不要使用磁力搅拌器，建议使用头顶或桨搅拌器的步骤列出上述。关键因素是避免树脂上的高剪应力，同时成功地均匀混合。用磁力搅拌棒搅拌有磨损或剪切珠子的风险，导致不希望的“细粒”-色谱术语的细碎片。架空搅拌必须是低剪切和尽可能少的量，以避免过度混合。细粒的不利影响包括柱内流动减少和不均匀，不利于分离的分辨率和一致性。粒子的降解也会导致树脂寿命的减少。

Caframo开销搅拌器提供用于可重复结果的低剪切悬挂的功能和灵活性。所有型号上的数字显示屏显示RPM中的速度，可以通过触摸按钮以1转/分的增量逐渐调整。这2010包括一个计时器，可以停止搅拌，以避免过度混合树脂。卡盘和通轴便于安装和定位低剪切叶轮足够的激动暂停矩阵并最大限度地减少罚款的风险。联系我们为您的需求找到最佳解决方案。

A190

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 BDC2010

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 A511

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